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    青蒿素與菌液測定的前世今生

    更新時(shí)間:2019-07-01      點(diǎn)擊次數:1889
    前言
    由屠呦呦團隊深度開(kāi)發(fā)的青蒿素研究,在近有了新的進(jìn)展-通過(guò)增加用藥周期和聯(lián)合用藥解決瘧原蟲(chóng)對其耐藥性[1]。而青蒿素也面臨著(zhù)價(jià)格昂貴及供應不足的難題,研究者利用菌體構建合成青蒿素的前體的研究[2]能夠提供參考思路。

     

     

       

    菌體的生長(cháng)情況可用OD600初步判斷菌落生長(cháng)情況并間接測定菌落的密度,


     

    是因為某特定波長(cháng)下,菌懸液的細胞濃度僅在一定的范圍內與對應的吸光度值呈正比關(guān)系,不同的是,針對非球狀的放線(xiàn)菌和某些霉菌等以及培養基中有其他渾濁物質(zhì)則不能通過(guò)該方法推斷濃度。


     

    如果菌液OD600在0.6-0.8之間,表明細菌處于旺盛生長(cháng)的對數生長(cháng)期細胞生長(cháng),OD600>3表明細菌已經(jīng)飽和等,這些僅僅是粗略估計菌落的生長(cháng)情況。


     

    想要知道較為的菌落濃度,需要將制備好的菌懸液梯度稀釋后,以未加菌液的培養基做空白對照,使用分光光度計分別測定OD600;并用平板計數法計算菌落總數。繪制標準曲線(xiàn),來(lái)推算未知濃度菌液的生長(cháng)狀態(tài)。


     

    若某一菌液的OD值為負,可能是細菌與培養基發(fā)生變色反應,顏色的改變影響吸光度數值。菌液在測定前保持懸浮狀態(tài)能夠保證測定的準確性。


     

    由于600nm處對濁度的敏感度高,常用600nm為檢測波長(cháng),也可以對菌液進(jìn)行全波長(cháng)掃描,在其大吸收峰波長(cháng)下進(jìn)行測定。

     

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    小寶出品的 Micro Drop 超微量分光光度計可檢測OD600,雙上樣方式全波長(cháng)掃描,

     

     

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    [1] Wang J, Xu C, Liao F L, et al. A Temporizing Solution to “Artemisinin Resistance”[J]. New England Journal of Medicine, 2019.

    [2]吳濤, 吳勝明, 殷晴, 等. 在大腸桿菌內引入甲羥戊酸途徑合成抗瘧藥青蒿素前體——紫穗槐-4,11-二烯[J]. 生物工程學(xué)報, 2011, 27(7).

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