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    超微量分光光度計有哪些使用限制?

    更新時(shí)間:2018-03-05      點(diǎn)擊次數:1725

      超微量分光光度計是現代分子生物實(shí)驗室常規使用儀器,在生命科學(xué)實(shí)驗室應用廣泛,但是我們必須了解一下分光光度計的一些使用限制,這樣才不會(huì )出現失誤或者產(chǎn)生危險。

      在說(shuō)使用限制之前,我們先來(lái)了解一下超微量分光光度計的工作原理是物質(zhì)對光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律。,超微量分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。

      論瑯伯-比爾定律的限制性條件:

      其一:通過(guò)溶液的光必須是平行的;

      其二:通過(guò)溶液的光必須是單色光;

      其三:待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過(guò)高,這是瑯伯-比爾定律首要的三個(gè)前提條件。

      在實(shí)際的分光光度計的制造和使用過(guò)程中這三個(gè)條件是不可能達到的:

      其一:因為光是直線(xiàn)傳播的,在分光光度計制造過(guò)程中,燈源發(fā)出的光是發(fā)散的,經(jīng)過(guò)聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過(guò)溶液的整體過(guò)程中,光是不可能平行的。

      其二:燈源發(fā)出的光是復合光,經(jīng)過(guò)狹縫,再經(jīng)過(guò)光柵分光等步驟,因為受到狹縫和光柵本身的限制,光柵分光不可能達到純單色光。還有光度計的整體設計問(wèn)題,光度計不可能沒(méi)有其它的雜光存在。

      其三:用戶(hù)的溶液也不可能是純凈的,也會(huì )含有一些雜質(zhì),這些對光度的吸收都會(huì )存在影響。除以上三個(gè)方面的影響外,在實(shí)際的光度計應用過(guò)程中還會(huì )存在其他因素的影響,例如:

      1、經(jīng)過(guò)比色皿的光是否垂直;

      2、比色皿寬度是否為10mm的標準值;

      3、測試波長(cháng)是否準確;

      4、程序設計是否存在漏洞等等,都會(huì )直接影響到利用瑯伯-比爾定律計算出的結果。

      所以在日常的測試過(guò)程中,得出的結果和瑯伯-比爾定律有些偏差是很正常的,只是我們關(guān)注偏差多少的問(wèn)題。

      關(guān)于超微量分光光度計的使用限制就給大家介紹到這里了,更多超微量分光光度計資訊請繼續關(guān)注邁上。

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